2012年， 南京大學(xué)張辰宇教授及其團(tuán)隊(duì)在Cell Research雜志（22(1)，2012）上發(fā)表了一篇有關(guān)小RNA（miRNA）的論文（為敘述方便，以下簡(jiǎn)稱(chēng)“張文”）， 該文在國(guó)內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域引起重視。

“張文”的要點(diǎn)是：口服植物食品，植物中的小RNA可以進(jìn)入動(dòng)物和人體內(nèi)， 並能調(diào)節(jié)肝臟的生理功能。如果這能被確證，則在國(guó)際上就是一個(gè)重大的發(fā)現(xiàn)：植物的小RNA可以通過(guò)口服，從植物食品轉(zhuǎn)移到動(dòng)物，并調(diào)控動(dòng)物基因的表達(dá)，即miRNA在植物界和動(dòng)物界之間可以實(shí)現(xiàn)“跨界基因調(diào)控”（cross-kingdom gene regulation）。它暗示是否可用此途徑來(lái)研制口服RNA新藥，治療或控制某些重要疾病。即使沒(méi)有普遍性，僅存在于有限的物種之間（如他們發(fā)現(xiàn)在小鼠中存在水稻的miR168），也是一個(gè)很有意義的發(fā)現(xiàn)。

從科學(xué)發(fā)展角度看，這本來(lái)是一件很正常的事；并且很明顯，這一研究結(jié)果如果成立，首先是對(duì)已有的生理學(xué)知識(shí)構(gòu)成挑戰(zhàn)。奇怪的是，個(gè)別記者硬是把它與轉(zhuǎn)基因作物聯(lián)系起來(lái)，杜撰和編造了這是“轉(zhuǎn)基因作物非常真實(shí)的危險(xiǎn)”?！胺崔D(zhuǎn)”人士更是如獲至寶，似乎抓住了一根救命稻草，乘機(jī)造謠攻擊，蒙騙公眾，將轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)一步妖魔化。

其實(shí)，張辰宇教授本人并沒(méi)有把他們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與轉(zhuǎn)基因作物的安全性聯(lián)系起來(lái)，可以說(shuō)“連想都沒(méi)有想過(guò)”。他們?cè)谖恼轮兄皇钦f(shuō)：“水稻中的一些小且易碎的核酸分子，在經(jīng)受許多消化吸收屏障后仍能存活，并最終下調(diào)小鼠肝臟基因的表達(dá)，可能影響其膽固醇水平”。

一個(gè)新的科學(xué)發(fā)現(xiàn)必須接受同行實(shí)驗(yàn)重復(fù)驗(yàn)證和嚴(yán)肅認(rèn)真的科學(xué)討論，然后才能得出正確的結(jié)論?！皬埼摹卑l(fā)表到現(xiàn)在3年半過(guò)去了，國(guó)際上不少重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也已陸續(xù)發(fā)表，隨著時(shí)間的推移，結(jié)論已經(jīng)比較明晰。本文提供一些最新的數(shù)據(jù)、評(píng)論和結(jié)論。

植物和動(dòng)物細(xì)胞里都有自己特有的 miRAN，它在生長(zhǎng)發(fā)育中起著一定的調(diào)節(jié)作用（可查miRNA數(shù)據(jù)庫(kù)）。下表中列出了各種農(nóng)作物、水果、蔬菜中高表達(dá)的小RNA。

檢測(cè)miRNA的方法有多種，如：微陣列（基因芯片）法（microarrays）、定量反轉(zhuǎn)錄PCR法（qRT-PCR，PCR為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的簡(jiǎn)稱(chēng)，是快速檢測(cè)基因的常用方法）、數(shù)字PCR（digital PCR）、測(cè)定RNA堿基序列等等。由于這些方法的靈敏度很高，可測(cè)出含量很低的核酸分子；但因?yàn)楹怂崞毡榇嬖冢瑴y(cè)定中因核酸污染造成的假陽(yáng)性也很常見(jiàn)。當(dāng)檢測(cè)出的miRNA含量很低時(shí)，首先要考慮的是，是否存在污染或儀器的背景噪音，而不應(yīng)馬上為你測(cè)出了極低量的小RNA分子而狂喜。

迄今重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果已有不少報(bào)道，歸納起來(lái)有兩方面：一是測(cè)出的植物miRNA更可能是污染，是假象；二是植物miRNA在動(dòng)物體內(nèi)表現(xiàn)生理功能的可能性很小。

1，測(cè)出的植物小RNA可能是污染，是假象

Snow等選擇了3種普遍食用的富含小RNA(MIR156a、MIR159a、MIR169a)的水果（蘋(píng)果，香蕉和鱷梨）作為檢測(cè)對(duì)象。這些miRNA高度穩(wěn)定，且易于檢測(cè)。檢測(cè)常吃這些水果的健康運(yùn)動(dòng)員的血漿，結(jié)果是：人類(lèi)本身具有的miR-16能夠檢測(cè)到，但沒(méi)有檢測(cè)到口服的三種植物miRNA（Snow 等，Ineffective delivery of diet-derived microRNAs to recipient animal organisms. RNA Biol. 10，2013）。

蜂蜜、蜜腺和花粉是蜜蜂的主要植物性食源，其中含有較高的MIR156a、MIR159a和MIR169a。在分析蜜蜂腸道時(shí)，可以檢測(cè)到蜜蜂本身具有的miRNA let-7，但檢測(cè)不到植物來(lái)源的MIR159a和MIR169a，在每個(gè)細(xì)胞中只檢測(cè)到一個(gè)MIR156a（Snow 等，RNA Biol. 10，2013）。

用富含植物miRNA（MIR156a、MIR159a、MIR169a）的蔬菜或大豆以及含動(dòng)物酪蛋白或豬油的食品（含動(dòng)物miRNA，沒(méi)有植物miRNA）分別飼喂小鼠，然后檢測(cè)小鼠血漿。沒(méi)有檢測(cè)到植物性的MIR159a和MIR169a。MIR156a在一個(gè)細(xì)胞中最多檢測(cè)到1個(gè)（Snow 等，RNA Biol. 10，2013）。

Snow按照“張文”的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，將未經(jīng)處理的富含MIR156a、MIR159a和MIR169a的鱷梨飼喂小鼠，可以檢測(cè)出動(dòng)物性的miR-16，除偶然檢測(cè)出極低量的MIR156a外，也沒(méi)有檢測(cè)出任何痕跡的植物MIR159a和MIR169a（Snow 等，RNA Biol. 10，2013）。

一些實(shí)驗(yàn)室給動(dòng)物飼喂不含有植物miRNA的飼料，竟然發(fā)現(xiàn)動(dòng)物體內(nèi)也有植物miRNA（Zhang Y等，Analysis of plant-derived miRNAs in animal small RNA datasets. BMC Genomics 13，2012）。

Witwer等用靈長(zhǎng)目動(dòng)物獼猴做了類(lèi)似的實(shí)驗(yàn)，喂食富含植物miRNA、不含動(dòng)物miRNA的大豆和水果做成的奶昔類(lèi)似物（shake）。飼喂后1、4、12小時(shí)采集血漿，用一種新的特異的RNA純化試劑盒和定量反轉(zhuǎn)錄PCR方法檢測(cè)。植物性的miRNA（MIR160、MIR166、MIR167、MIR168和MIR172）都沒(méi)有檢測(cè)到。用靈敏度極高、可以檢測(cè)出非常低含量植物miRNA的微滴數(shù)字PCR（Droplet digital PCR）法，也沒(méi)有檢測(cè)到植物性的miRNA（Witwer K.W.等）。

以上實(shí)驗(yàn)的一致結(jié)論是：采用多種靈敏度極高的檢測(cè)技術(shù)，對(duì)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物，小鼠以及昆蟲(chóng)做的飼喂植物性miRNA的實(shí)驗(yàn)，都沒(méi)有能證實(shí)“張文”的結(jié)果，所以有人很保守地說(shuō)，這最多只是“一個(gè)實(shí)驗(yàn)室特殊技術(shù)或特殊實(shí)驗(yàn)條件下的結(jié)果”（reflect a lab-specific technical or experimental condition），而不是“一個(gè)普遍的生命現(xiàn)象”（a general biological phenomenon）。

2013年英國(guó)Newcastle大學(xué)的Dickinson用小鼠做重復(fù)實(shí)驗(yàn)，得出結(jié)論認(rèn)為小鼠口服大米后，缺乏植物性小RNA進(jìn)入血漿和肝臟的證據(jù)（Lack of detectable oral bioavailability of plant microRNAs after feeding in mice. Nature Biotechnology 31（11），2013）。實(shí)驗(yàn)分以下處理：

表格的文字說(shuō)明見(jiàn)下：

處理1：人工合成飼料（高度純化，完全去除植物性成分），測(cè)血漿；

處理2：人工合成飼料， 測(cè)肝；

處理3：營(yíng)養(yǎng)平衡飼料（人工合成飼料加40%大米，含54 fmol/g水稻miR168a），測(cè)肝；

處理4：?jiǎn)挝勾竺罪暳希ù竺渍?5%，含水稻miRNA），測(cè)肝

飼喂小鼠1、3、7天后，取小鼠的血漿和肝臟做RNA測(cè)序，檢測(cè)結(jié)果顯示：

飼喂大米的處理，每100萬(wàn)個(gè)miRNA中僅檢測(cè)出4-16個(gè)類(lèi)似于水稻的小RNA。

只喂食合成飼料（沒(méi)有植物性miRNA）的處理中，也能檢測(cè)出類(lèi)似于水稻的miRNA，其含量與喂食大米飼料的小鼠差不多。

這些與水稻小RNA類(lèi)似的序列，經(jīng)鑒定與miR414相似，在水稻谷粒中檢測(cè)不到它，但在所有小鼠樣本中都能檢測(cè)到相似的量，不管飼喂什么樣的飼料。同時(shí)，用定量PCR法檢測(cè)飼喂三種飼料的小鼠肝臟和血漿，也沒(méi)有檢測(cè)到水稻的miR168a。

Dickinson認(rèn)為，測(cè)出的與水稻小RNA類(lèi)似的序列，可能是測(cè)序錯(cuò)誤、即假象（artifact）或核酸交叉污染所引起。他列舉了三點(diǎn)理由說(shuō)明植物食品中的小RNA進(jìn)入動(dòng)物和人體血漿及肝臟缺乏證據(jù)。（1）Zhang Y.等 (BMC Genomics 13：381，2012)報(bào)告，經(jīng)普查大量的動(dòng)物小RNA公共數(shù)據(jù)庫(kù)，沒(méi)有證據(jù)說(shuō)明有任何主要植物來(lái)源的小RNA在動(dòng)物樣本中積累；（2）口服RNA藥物因常常被消化降解很少能成功生效；（3）植物小RNA有長(zhǎng)期安全食用的歷史，沒(méi)有證據(jù)說(shuō)明小RNA被吸收并有生理功能。

Dickinson的重復(fù)實(shí)驗(yàn)中還測(cè)定了小鼠的低密度脂蛋白（LDL，low density lipoprotein），發(fā)現(xiàn)生食（未經(jīng)煮熟）75%大米的小鼠，3天和7天后血漿中的LDL顯著增加，但飼喂?fàn)I養(yǎng)平衡飼料（含40%大米和54 fmol/g水稻miR168a），小鼠的LDL則正常，沒(méi)有增加，盡管實(shí)驗(yàn)中加入的水稻小RNA比“張文”中用的量高22倍。故“張文”所說(shuō)的LDL增加，不是由于水稻中的小RNA（測(cè)不出）產(chǎn)生什么生物學(xué)效應(yīng)，而是因?yàn)閮H僅生食大米、營(yíng)養(yǎng)不平衡造成，因?yàn)轱暳现械闹?、膽固醇和蛋白質(zhì)比嚙齒動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)飼料要低。

張辰宇教授對(duì)Dickinson的報(bào)道做了回答（“Reply to Lack of detectable oral bioavailability of plant microRNAs after feeding in mice”）。有興趣的讀者可以去查閱，在此不再多做介紹。

今年5月，美國(guó)科學(xué)院舉辦了有關(guān)miRNA的專(zhuān)門(mén)論壇。論壇上認(rèn)可Dickinson的工作，引用了他的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，而且還作了進(jìn)一步的發(fā)揮。

2，植物miRNA在動(dòng)物體內(nèi)表現(xiàn)生理功能的可能性很小

由于國(guó)際上基本沒(méi)有實(shí)驗(yàn)室能夠在動(dòng)物和人類(lèi)的血液和組織中檢測(cè)到口服植物的miRNA，所以沒(méi)有人能去檢查植物miRNA在動(dòng)物體內(nèi)所表現(xiàn)出的生理功能。

在美國(guó)科學(xué)院的論壇上，哈佛醫(yī)學(xué)院的一位教授作了一個(gè)主題報(bào)告，下面摘取他報(bào)告的2張幻燈片。.

第一張幻燈片指出，即使動(dòng)物物體內(nèi)檢測(cè)出植物性miRNA，因其在食物中的含量太少，不足以行使miRNA的調(diào)節(jié)功能（下圖）：

圖中明確指出，如果在動(dòng)物中確有口服植物miRNA的話(huà)，要行使其生理功能，必須達(dá)到每個(gè)細(xì)胞中有100個(gè)拷貝的miRNA才有可能。要達(dá)到這個(gè)量，需要一次吃1670公斤哈密瓜。水稻上也已有人做過(guò)計(jì)算，需要一次吃33公斤大米才有可能（見(jiàn)：Safety assessment of food and feed from biotechnology-derived crops employing RNA-mediated gene regulation to achieve desired traits: A scientific review. Regulatory Toxicology & Pharmacology 66：167–176，2013）。

第2張幻燈片是這位哈佛醫(yī)學(xué)院教授的結(jié)論：

以上只是簡(jiǎn)介最近的國(guó)際研究動(dòng)態(tài)和進(jìn)展，絕無(wú)對(duì)張辰宇教授不恭之處。

下面要特別說(shuō)一說(shuō)miRNA與轉(zhuǎn)基因作物的安全性問(wèn)題。

“張文”發(fā)表后，國(guó)內(nèi)的“反轉(zhuǎn)”集團(tuán)不久就掀起了一股聲勢(shì)浩大的反轉(zhuǎn)輿論，說(shuō)張教授的結(jié)果沖擊了轉(zhuǎn)基因作物及其食品的安全性。那么把miRNA與轉(zhuǎn)基因安全聯(lián)系起來(lái)是怎么來(lái)的呢？

現(xiàn)在查到的源頭文章是一個(gè)叫Ari LeVaux的記者發(fā)表在《大西洋》（The Atlantic ）雜志上的一篇文章，題為“遺傳改良食品非常真實(shí)的危險(xiǎn)”（“The very real danger of genetically modified foods”）。 其中說(shuō)：“ 中國(guó)南京大學(xué)的研究者發(fā)現(xiàn)吃了米飯后，水稻里的小片段核酸（RNA）到了人的血液和器官里，與人的肝臟細(xì)胞受體結(jié)合，影響肝臟從血液中吸取膽固醇?！蔽恼落秩緛?lái)自水稻的miRNA損害了小鼠的基因表達(dá)。

在美國(guó)科學(xué)院論壇上，很多行內(nèi)科學(xué)家和記者指出了《大西洋》雜志文章的許多謬誤，記者Ari LeVaux后來(lái)也撤回了他的一些論點(diǎn)。但一些人仍然把這篇文章作為“救命稻草”，反對(duì)轉(zhuǎn)基因，國(guó)內(nèi)反轉(zhuǎn)份子散布“miRNA沖擊轉(zhuǎn)基因安全性”的謠言也全都來(lái)自The Atlantic 雜志的這篇文章。

人類(lèi)吃稻米已有5000年以上的歷史，全世界50%以上的人口特別是亞洲以稻米為主糧，如果水稻里的miRNA對(duì)人有害的話(huà)，試想今天會(huì)是什么樣的情景？農(nóng)作物、水果、蔬菜中歷來(lái)存在小RNA，并不是有了轉(zhuǎn)基因作物后才有小RNA。植物性食品的長(zhǎng)期安全食用歷史，說(shuō)明小RNA既與傳統(tǒng)非轉(zhuǎn)基因植物食品的安全性無(wú)關(guān)，也與轉(zhuǎn)基因作物（GMO）食品的安全性無(wú)干，兩者之間扯不上任何關(guān)系。反過(guò)來(lái)說(shuō)，如果“小RNA沖擊GMO食品的安全性”，那也一定會(huì)“沖擊傳統(tǒng)非GMO食品的安全性”。以上列舉的國(guó)際最新研究結(jié)果表明，動(dòng)物血液和器官中測(cè)不出植物的小RNA，它更不可能在動(dòng)物中行駛其調(diào)節(jié)基因表達(dá)的生理功能。這是很淺顯的道理和確鑿的事實(shí)，顯然，反轉(zhuǎn)者的鼓噪和責(zé)難只能是夢(mèng)囈，在明眼人面前，各種謊言和謠言本來(lái)就不堪一擊。